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英亚网址官网 枯草芽孢杆菌抒发系统知若干?

时间:2022-09-14 13:38 点击:131 次

英亚网址官网 枯草芽孢杆菌抒发系统知若干?

枯草芽孢杆菌看成一种革兰氏阳性细菌,由于其具有非致病性、分泌卵白智力强的特色和邃密的发酵基础及坐蓐技能,是当今原核抒发系统中抒发和分泌外源卵白的盼愿宿主,成为原核抒发系统中的一种紧迫的阵势菌株。枯草芽孢杆菌用途多多,底下先容一下用它进行卵白抒发的具体操作:

枯草芽孢杆菌抒发系统卵白抒发SOP

01针对外源基因片断进行密码子优化,基因合成办法片断。

02将办法基因片断连气儿到穿梭抒发载体上,滚动大肠杆菌。

03摇菌,准备安妥浓度的质粒。

04制作枯草芽孢杆菌感受态细胞,将质粒转入不同的枯草芽孢杆菌宿主中,涂平板,37℃培养过夜。

05挑单克隆并进行筛选执意。

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本届比赛设标准组256人、战棋组256人。

06针对不同的抒发载体,采选不同的卵白抒发神志进行抒发,获取办法卵白。如滚动pHT43抒发载体,获取阳性克隆后,37℃培养至OD600=0.8-1.0,添加0.1mM IPTG商量剂进行不同时分温度条目的商量抒发,取样分析做抒发测试。

07卵白纯化测试,聘用最优抒发条目进行200ml抒发纯化测试,估算卵白得率。

08放大及纯化,依据最好条目抒发纯化办法卵白。

09托付卵白。

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